Jak odsolovat bílkoviny?

Jak odsolovat bílkoviny?
Jak odsolovat bílkoviny?
Anonim

Vzorek můžete také odsolit ultrafiltrací na 1 desetinu předchozího objemu, znovu naředit a opakovat krok UF. Nejlepší metodou pro odsolování je odsolování gelovou filtrací proti 50 mM pufru, než ultrafiltrace (klasická, ne odstředivá).

Co je odsolování při čištění bílkovin?

Odsolování se používá k odstranění solí z proteinových roztoků, fenolu nebo neinkorporovaných nukleotidů z nukleových kyselin nebo přebytečných síťovacích nebo značících činidel z konjugovaných proteinů.

Jak čistíte proteiny?

Při velkoobjemovém čištění proteinů je běžným prvním krokem k izolaci proteinů precipitace síranem amonným (NH4) 2SO4. To se provádí přidáváním zvyšujících se množství síranu amonného a sběrem různých frakcí vysráženého proteinu. Následně může být síran amonný odstraněn pomocí dialýzy.

Jak tlumíte výměnné proteiny?

Výměna pufru se však provádí první ekvilibrací s pryskyřicí kolony s pufrem, ve kterém by měl vzorek skončit. V obou případech složky pufru přenášející vzorek do kolona bude nahrazena roztokem, kterým je kolona předem ekvilibrována.

Kterou z následujících chromatografických technik lze použít k odsolení bílkovin?

Jak je uvedeno výše, gelovou filtraci lze efektivně využít pro bílkovinyodsolování a provádí se nejprve ekvilibrací gelové filtrační kolony vodou. Výměna pufru se však provádí nejprve ekvilibrací pryskyřice kolony s cílovým pufrem.

Doporučuje: