Pokud se však emisní spektra překrývají, může být detekována fluorescence z více než jednoho fluorochromu. Ke korekci tohoto spektrálního překrytí se používá proces kompenzace fluorescence. To zajišťuje, že fluorescence detekovaná v konkrétním detektoru pochází z fluorochromu, který je měřen.
Proč potřebujeme kompenzaci v průtokové cytometrii?
Pro experiment průtokové cytometrie je vyžadována kompenzace kvůli fyzice fluorescence. Fluorochrom je excitován a emituje foton v rozsahu vlnových délek. Některé z těchto fotonů se přelijí do druhého detektoru, což způsobí, že jednotlivé obarvené vzorky vypadají dvakrát pozitivní.
Jaký je hlavní účel použití kompenzačního článku?
Primárním účelem je umožnit měření skutečné fluorescence v primárním kanálu kontaminovaném přeléváním ze sousedních fluoroforů. Proto kompenzace koriguje fluorescenční „překročení“mezi fluorofory. Není však dokonalý a nemůže opravit všechny nežádoucí účinky.
Co je kompenzační matice?
Kompenzační matice je vypočítána pomocí jednobarevných fluorescenčních kontrolních souborů, které jsou shromážděny na ImageStream nebo FlowSight se všemi shromážděnými kanály a bez osvětlení světlého pole nebo SSC.
Co je spektrální kompenzace?
Použití spektrálníkompenzace znamená, že signál z neprimárních detektorů se stále používá ke zlepšení skutečného signálu značek, kde je to možné. Primární kontrolní vzorky se používají pro pojmenování parametrů. … Vzorky použité pro primární detektory také pomáhají pojmenovat tyto parametry po spektrální kompenzaci.
