Jakmile se buňky objeví oddělené, přidejte 2 objemy předehřátého kompletního růstového média k inaktivaci trypsinu. Jemně dispergujte médium několikanásobným pipetováním na povrch buněčné vrstvy, abyste zajistili obnovu >95 % buněk.
Jak zastavím aktivitu trypsinu?
Štěpení trypsinem lze zastavit zmražením nebo snížením pH reakce pod pH 4 přidáním kyseliny mravenčí, octové nebo trifluoroctové (trypsin znovu získá aktivitu, když pH je zvýšeno nad pH 4). Natrávené vzorky lze skladovat při -20 °C.
Co neutralizuje trypsin?
pufr obsahující ionty vápníku a hořčíku také zpomalí aktivitu trypsinu. FBS je však efektivnější způsob, jak inhibovat aktivitu trypsinu.
Inaktivuje sérum trypsin?
Sérum inaktivuje zbývající trypsin z enzymatického štěpení ledvin a proteolytické enzymy následně syntetizované buňkami. Čerstvě trypsinizované buňky mohly být pěstovány na monovrstvy v nepřítomnosti séra za předpokladu, že byly opakovaně promyty, aby se odstranil zbytkový trypsin.
Kolik médií je potřeba k deaktivaci trypsinu?
Dokud používáte poměr alespoň 1:1 5-10% séra-médium obsahující váš trypsin, měla by být více než dostatečná inhibice a poté by měla následovat centrifugace a výměna média za čerstvé médium.
