Čím větší je molekulová hmotnost, tím delší je spirála a tím pomaleji se molekula pohybuje. Takže elektroforéza + SDS se odděluje na základě molekulové hmotnosti, nikoli na základě přirozeného náboje. Důležitá poznámka: Proteiny stejné délky obvykle nelze oddělit gelovou elektroforézou + SDS.
Jak oddělíte proteiny stejné molekulové hmotnosti?
Centrifugace, elektroforéza a chromatografie jsou nejběžnější techniky pro čištění a analýzu proteinů. Centrifugace odděluje proteiny na základě jejich rychlosti sedimentace, která je ovlivněna jejich hmotností a tvarem.
Jaké techniky oddělují proteiny na základě náboje?
Proteiny lze oddělit na základě jejich čistého náboje pomocí iontoměničové chromatografie. Pokud má protein čistý kladný náboj při pH 7, obvykle se naváže na sloupec kuliček obsahujících karboxylátové skupiny, zatímco záporně nabitý protein nikoli (obrázek 4.4).
Která z následujících technik se nejlépe hodí k separaci proteinů na základě molekulové hmotnosti?
Chromatografické metody založené na dělení jsou velmi účinné při separaci a identifikaci malých molekul, jako jsou aminokyseliny, sacharidy a mastné kyseliny. Avšak afinitní chromatografie (tj. iontoměničová chromatografie) jsou účinnější při separaci makromolekul jako nukleových kyselin a proteinů.
Jaký typ sloupcechromatografie odděluje proteiny na základě molekulové hmotnosti?
Gelová filtrační (GF) chromatografie odděluje proteiny výhradně na základě velikosti molekul. Separace se dosahuje pomocí porézní matrice, ke které mají molekuly ze sterických důvodů různé stupně přístupu – tj. menší molekuly mají větší přístup a větší molekuly jsou z matrice vyloučeny.
