Trypsinizace je proces buněčné disociace pomocí trypsinu, proteolytického enzymu, který štěpí proteiny, k disociaci adherentních buněk z nádoby, ve které jsou kultivovány. Když je trypsin přidán do buněčné kultury, rozkládá proteiny, které umožňují buňkám přilnout k nádobě.
Proč trypsinizujeme buňky?
Trypsinizace se často provádí za účelem povolení průchodu buněk do nové nádoby, pozorování za účelem experimentování nebo snížení stupně konfluence v baňce odstraněním procenta buňky.
Jak trypsin odděluje buňky?
Trypsin/EDTA je kombinovaná metoda pro oddělení buněk. Trypsin seká adhezní proteiny v interakcích buňka-buňka a buňka-matrix tím, že štěpí aminokyselinu adhezních proteinů specificky na lysinu nebo agininu na C-konci, pokud upstream aminokyselina není prolin.
Jak získáte trypsinizované adherentní buňky?
Postup
- Vyjměte médium z kultivační nádoby odsátím a promyjte monovrstvu solným roztokem bez Ca2+ a Mg 2+ k odstranění všech stop séra. …
- Do kultivační nádobky (nádobek) nadávkujte dostatečné množství trypsinu nebo roztoku trypsinu/EDTA, aby byla zcela pokryta monovrstva buněk, a umístěte do inkubátoru při teplotě 37 °C na ~2 minuty.
Jak deaktivuji trypsin v buněčné kultuře?
Jakmile se buňky objeví oddělené, přidejte 2 svazkypředehřátého kompletního růstového média k inaktivacitrypsinu. Jemně dispergujte médium několikanásobným pipetováním na povrch buněčné vrstvy, abyste zajistili obnovu >95 % buněk. Pro kultury bez séra, sójový inhibitor trypsinu (č. produktu
