Nanášení kontrolních protilátek jsou důležité kontroly, protože indikují rovnoměrné nanášení vzorků do všech jamek. Kontroly plnění také ukazují správný přenos proteinů na membránu během procesu Western blotting. Kontroly načítání jsou typicky proteiny s vysokou a všudypřítomnou expresí.
Co dělá kontrola načítání?
Kontrola nanášení je protein používaný jako kontrola v experimentu Western blotting. … Používají se k zajištění toho, že protein byl nanesen rovnoměrně do všech jamek.
Proč ve Western blotu používáme kontrolu načítání?
Načítání ovládacích prvků má ve westernových přenosech druhou roli jako ovládací prvek. Mohou být použity pro kontrolu, že došlo k rovnoměrnému přenosu z gelu na membránu přes celý gel. To je nezbytné, když se provádějí srovnání hladin proteinové exprese mezi vzorky.
Jak používáte kontrolu načítání ve Western blotu?
Signály z kontrol načítání se obvykle používají k normalizaci signálů ze sledovaných proteinů. Chcete-li pro tyto účely použít nanášecí kontrolu, měla by být detekce s kontrolní proteinovou protilátkou a experimentální protilátkou provedena na stejném blotu. Jako kontroly plnění se používá celá řada různých proteinů.
Proč se aktin používá jako kontrola načítání?
Beta-aktin se obvykle používá jako kontrola načítání pro Western Blot nanormalizovat hladiny detekovaných proteinů potvrzením, že obsah proteinu je v celém gelu stejný.
